آیا میدانید چرا آمادهسازی صحیح الیگوهای DNA و RNA کلید موفقیت آزمایش شماست؟
اگر در آزمایشگاه با DNA و RNA سر و کار دارید، حتماً با الیگوها آشنا هستید. این مولکولهای حیاتی معمولاً بهصورت پودر فریز-درای (خشکشده) به دست شما میرسند و احیای صحیح آنها (Resuspension) اولین قدم برای جلوگیری از هدر رفتن سرمایه و زمان شماست.
در اینجا یک راهنمای کاربردی و سریع برای این کار آورده شده است.
بخش اول: احیای الیگو (Resuspension)
قبل از هر چیز، برای حل کردن پودر، از یک محلول با کیفیت بالا استفاده کنید. انتخابهای شما شامل:
- TE Buffer: (بافر تریس-EDTA)
- Tris Buffer: (بافر تریس)
- Molecular Biology Grade Water: (آب با گرید بیولوژی مولکولی)
نکته مهم: استفاده از آب معمولی (حتی آب مقطر) به دلیل وجود نوکلئازها (آنزیمهای تخریبکننده DNA و RNA) میتواند الیگوهای شما را به سرعت تخریب کند. پس حتماً از آب مخصوص بیولوژی مولکولی استفاده کنید.
برای رسیدن به غلظت مورد نیاز، کافیست از این فرمول ساده استفاده کنید:
- برای غلظت 1mM: به ازای هر نانومول (nmol) الیگوی خشکشده، 1 میکرولیتر (μL) محلول اضافه کنید.
- برای غلظت 100μM: به ازای هر نانومول (nmol) الیگوی خشکشده، 10 میکرولیتر (μL) محلول اضافه کنید.
بخش دوم: رقیقسازی هوشمندانه (Dilution & Aliquoting)
بعد از احیا، محلول اصلی (Stock) شما آماده است. اما آیا میدانستید که استفاده مستقیم از این محلول، خطرناک است؟
بهترین کار این است که:
- محلول اصلی (Stock) را در غلظت بالا نگهداری کنید. غلظتهای بالاتر پایداری بیشتری دارند.
- محلولهای کاری (Working Solutions) تهیه کنید. مثلاً اگر محلول اصلی شما 100μM است، میتوانید یک محلول 10μM برای استفاده روزمره آماده کنید.
- بهترین راه: ایجاد «آلیکوت» (Aliquots)
- آلیکوتها نمونههای کوچک از محلول اصلی هستند که در چند لوله مجزا نگهداری میشوند.
- این کار از آلودگی کل محلول اصلی جلوگیری میکند.
- به حداقل رساندن چرخههای ذوب و انجماد، عمر مفید الیگوهای شما را به شدت افزایش میدهد.
نکته نهایی: هنگام رقیقسازی، از رقیقسازیهای بسیار بزرگ (مثلاً 1 به 1000) به صورت یک مرحلهای خودداری کنید. به جای آن، رقیقسازی را بهصورت مرحلهای (step-wise) انجام دهید تا دقت کار شما بالاتر برود.