باکتری E. coli DH5α

• ابزار اساسی: باکتری E. coli (اشریشیا کُلی) سنگ بنای بیوتکنولوژی مدرن و مهندسی ژنتیک است. در میان تمام سویه‌های موجود، سویه DH5α به عنوان یکی از پرکاربردترین سویه‌ها در آزمایشگاه‌های سراسر جهان شناخته می‌شود.

• هدف اصلی: این سویه به طور خاص برای کاربردهای کلونینگ عمومی (General Cloning) و تکثیر پلاسمیدهای کوچک طراحی و بهینه‌سازی شده است.

مزایای علمی باکتری DH5α برای کلونینگ

چرا DH5α یک انتخاب ایده‌آل برای کلونینگ روتین و روزمره است؟ ویژگی‌های ژنتیکی کلیدی این سویه، آن را متمایز می‌کند:

۱. غربالگری کارآمد (Blue/White Screening)

• ژن lacZΔM15: این سویه دارای حذف (Deletion) در بخشی از ژن lacZ است. این ویژگی امکان استفاده از روش غربالگری آبی/سفید (Blue/White Screening) را فراهم می‌آورد.

• تشخیص سریع: این روش به محققان اجازه می‌دهد تا به سرعت کلونی‌های باکتریایی را که با موفقیت قطعه DNA مورد نظر را دریافت و در پلاسمید الحاق کرده‌اند (کلونی‌های سفید)، از کلونی‌هایی که پلاسمید خالی دارند (کلونی‌های آبی) تشخیص دهند.

۲. پایداری بالای ژنوم (High Insert Stability)

• جهش recA1: سویه DH5α دارای جهش recA1 است. پروتئین RecA در E. coli مسئول نوترکیبی همسان (Homologous Recombination) است.

• مزیت کلونینگ: با غیرفعال شدن پروتئین RecA، نرخ نوترکیبی‌های ناخواسته در پلاسمیدهای وارد شده به شدت کاهش می‌یابد و این امر به پایداری بالای توالی DNA الحاقی کمک می‌کند.

۳. کیفیت و بازدهی DNA بالا (High Yield and Quality)

• جهش endA1: این سویه همچنین دارای جهش endA1 است که پروتئین اندونوکلئاز I (Endonuclease I) را غیرفعال می‌کند.

• نتیجه: اندونوکلئاز I به طور طبیعی DNA پلاسمیدی را در حین استخراج تجزیه می‌کند. غیرفعال‌سازی این آنزیم، تضمین می‌کند که DNA پلاسمیدی استخراج شده دارای کیفیت بالاتر و بازدهی بیشتر باشد.

۴. کارایی ترانسفورماسیون (High Transformation Efficiency)

• تکثیر بهینه: DH5α برای دستیابی به کارایی ترانسفورماسیون بالا در نظر گرفته شده است، که آن را برای تکثیر پلاسمیدهای کوچک و با تعداد کپی بالا، انتخابی ایده‌آل می‌سازد.

• روش‌های ترانسفورماسیون:

  • روش رایج: معمولاً از روش‌های شیمیایی مانند کلرید کلسیم (CaCl2) برای ترانسفورماسیون این سویه استفاده می‌شود.

  • مشتقات پیشرفته: مشتقات ویژه‌ای مانند DH5α-E برای ترانسفورماسیون با استفاده از روش الکتروپوریشن (Electroporation) طراحی شده‌اند که می‌تواند کارایی را به مراتب افزایش دهد.

 پیوند DH5α به تحقیقات پیشرفته CRISPR

اگرچه DH5α یک سویه “ابزار” برای کلونینگ عمومی است، اما در خط مقدم تحقیقات ویرایش ژن نیز نقش محوری ایفا می‌کند.

• تولید پلاسمیدهای CRISPR: تمام ابزارهای پیشرفته‌ای که ما برای ویرایش ژن ارائه می‌دهیم (مانند پلاسمیدهای کدکننده Cas9، guide RNAها و الگوهای ترمیمی)، ابتدا باید در سویه‌هایی مانند DH5α کلون شده و در مقیاس بالا تکثیر شوند. (اینجا نقش محوری DH5α است)

• بررسی پایداری: از آنجایی که سیستم‌های CRISPR اغلب به پلاسمیدهای بزرگ یا آرایه‌های پیچیده gRNA نیاز دارند، استفاده از سویه‌ای با پایداری بالای الحاق (RecA-) مانند DH5α ضروری است تا اطمینان حاصل شود که ابزارهای ویرایشی پیش از انتقال به سلول‌های هدف، بدون جهش باقی می‌مانند.

• تست‌های اولیه: بسیاری از محققان از DH5α برای ساخت و تست اولیه پلاسمیدهای CRISPR استفاده می‌کنند و سپس برای تولید انبوه به سویه‌های خاص‌تر منتقل می‌شوند.

تخصص و اعتبار ما در ارائه کیت‌های کلونینگ با کارایی بالا و مواد اولیه مورد نیاز برای تحقیقات CRISPR، تضمین‌کننده موفقیت شماست.

چه در حال ساخت یک پلاسمید ساده در DH5α باشید و چه در حال مهندسی پیچیده‌ترین آرایه‌های gRNA برای ویرایش ژن، زیرساخت‌های ما برای شما آماده است.

برای سفارش باکتری DH5α تماس بگیرید.

باکتری E. coli O157:H7 Sakai

 Escherichia coli سویه O157:H7 شایع‌ترین گونه‌ای از E. coli روده‌ای خون‌ریزی‌دهنده (EHEC) است که عامل اصلی سندرم اورمیک همولیتیک (HUS)، یک نارسایی حاد کلیوی با نرخ مرگ و میر بالا، می‌باشد.

• الزام تحقیقاتی: برای توسعه روش‌های درمانی و واکسن‌های مؤثر، محققان نیاز دارند تا پاتوژن را در شرایط کنترل‌شده مطالعه کنند. سویه Sakai (که یک گونه کلیدی و مرجع است) مدل ایده‌آل برای این کار است.

• مسیر انتقال بحرانی: این باکتری از طریق گاو به انسان منتقل می‌شود و برای رسیدن به روده، باید از شدیدترین مانع طبیعی یعنی اسید معده جان سالم به در ببرد.

 قابلیت‌های کلیدی O157:H7 (بهره‌وری برای تحقیق)

بقا در برابر اسید، بحرانی‌ترین نقطه ضعف این پاتوژن و در نتیجه بزرگترین فرصت پژوهشی برای شما است:

۱. مقاومت به اسید (Acid Resistance) – هدف‌گیری پاتوژنز

• سد pH: pH طبیعی معده انسان بین ۱.۵ تا ۳.۰ متغیر است؛ محیطی که ۹۹% باکتری‌ها را می‌کشد.

• مکانیسم‌های فعال: O157:H7 دارای سیستم‌های دفاعی ژنتیکی (مانند سیستم‌های تخمیر آرژنین و گلوتامات) برای تنظیم pH داخلی است.ب

• با استفاده از این سویه، شما می‌توانید بیان ژن‌های مقاومت به اسید را مطالعه کرده و ژن‌های حیاتی را که به باکتری اجازه می‌دهند با دوز پایین ایجاد عفونت کند، شناسایی و هدف‌گیری کنید. این یک گام اساسی در توسعه داروهای ضد پاتوژن جدید است.

۲. پاتوژنز و توکسین شیگا (Shiga Toxin) – هدف‌گیری درمان

• تولید توکسین: سویه O157:H7 توکسین شیگا (Stx) تولید می‌کند که عامل اصلی آسیب به کلیه‌ها در HUS است.

• ارزش پژوهشی: محققان می‌توانند با استفاده از این سویه، چگونگی تنظیم بیان توکسین شیگا و چگونگی مهار تولید آن را مطالعه کنند.

برای سفارش باکتری O157:H7 sakai تماس بگیرید.